叶绿素a测定仪的使用方法

目前我国内陆自然水体的富营养化日益严重，导致水体中的藻类物质大量繁殖，由于藻类物质中含有叶绿素a，含量较为稳定，并且易于人工测定，因此可以通过使用水质叶绿素a测定仪检测水中浮游植物叶绿素a的含量，掌握水体的初级生产力情况和富营养化水平。

叶绿素a测定仪的原理

将一定量样品用滤膜过滤截留藻类，研磨破碎藻类细胞，用丙酮溶液提取叶绿素，离心分离后分别于750nm、664nm、647nm和630nm波长处测定提取液吸光度，根据公式计算水中叶绿素a的浓度，可以广泛适用于海洋监测、自来水、污水处理厂、水文水利、养殖渔业、大学和科研研究所，环保研究机构等。

叶绿素a测定仪的使用方法（以分光光度法为例）

1、水样的采集

一般使用有机玻璃采水器或其他适当的采样器采集水面下0.5m水样，湖泊、水库根据需要可进行分层采样或混合采样，采样体积为1L或500ml。如果水样中含沉降性固体（如泥沙等），应将水样摇匀后倒入2L量筒，避光静置30min，取水面下5cm水样，转移至采样瓶。在每升水样中加入1ml碳酸镁悬浊液，以防止酸化引起色素溶解。

2、制备水样

在过滤装置上装好玻璃纤维滤膜。根据水体的营养状态确定取样体积，具体可以参考过滤水样体积，用量筒量取一定体积的混匀水样，进行过滤，最后用少量蒸馏水冲洗滤器壁。

3、研磨

将样品滤膜放置于研磨装置中，加入3ml-4ml丙酮溶液，研磨至糊状。补加3ml-4ml丙酮溶液，继续研磨，并重复1-2次，保证充分研磨5min以上。将完全破碎后的细胞提取液转移至玻璃刻度离心管中，用丙酮溶液冲洗研钵及研磨杵，一并转入离心管中，定容至10ml。

4、浸泡提取

将离心管中的研磨提取液充分振荡混匀后，用铝箔包好，放置于4℃避光浸泡提取2h以上，不超过24h。在浸泡过程中要颠倒摇匀2-3次。

5、离心

将离心管放入离心机，以相对离心力1000×g（转速 3000 r/min～4000 r/min）离心10min。然后用针式滤器过滤上清液得到叶绿素a的丙酮提取液（试样）待测。

6、水样测定

将试样移至比色皿中，以丙酮溶液为参比溶液，叶绿素a测定仪于波长750nm、664nm、647nm、630nm处测量吸光度。750nm波长处的吸光度应小于0.005，否则需重新用针式滤器过滤后测定。最后水样中叶绿素a的质量浓度可以按照相应公式进行计算得出。